细胞培养中常见问题及解决方法2
培养细胞生长缓慢
可能原因:
•由于更换不同培养液或血清;
•培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏;
•培养物中有少量细菌或真菌污染;
•试剂保存不当;
•接种细胞起始浓度太低;
•细胞已老化;
•支原体污染 。
解决方法:
•比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验,让细胞逐渐适应新培养液;
•换入新鲜配置培养液,或补加谷氨酰胺及生长因子;
•用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物;
•血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存,需在1周内用完;
•增加接种细胞起始浓度;
•换用新的保种细胞;
•分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。
培养细胞死亡
可能原因:
•培养箱内无CO2;
•培养箱内温度波动太大;
•细胞冻存或复苏过程中损伤;
•培养液渗透压不正确;
•培养液中有毒代谢产物堆积。
解决方法:
•检测培养箱内CO2;
•检查培养箱内温度;
•取新的保存细胞种;
•检测培养液渗透压;
•换入新鲜培养液。